一、核心用途

• 贴壁 / 悬浮细胞的形态学观察

• 细胞蛋白表达定位 / 定量（免疫组化）

• 细胞凋亡 / 增殖检测

• 细胞纤维化 / 脂质沉积特殊染色

• 细胞基因表达（原位杂交）

二、标准完整流程（悬浮 / 贴壁通用）

1. 细胞收集（关键：形成致密细胞团）

• 悬浮细胞：离心（1000–1500 rpm，5 min），弃上清，PBS 重悬，再离心，重复 2 次

• 贴壁细胞：yi酶消化（0.25% yi酶 - EDTA），终止消化，离心收集，PBS 洗 2 次

• 终：细胞沉淀≥5×10?个（太少易丢失、切片无细胞）

2. 固定（防细胞结构破坏）

• 细胞沉淀加4% 多聚甲醛（体积≥沉淀 10 倍），室温固定 30–60 min

• 离心弃固定液，PBS 洗 2 次（每次 5 min）

3. 细胞团成型（避免松散）

• 固定后细胞加少量 PBS 重悬，转移至1.5 mL EP 管

• 再次离心（1500 rpm，5 min），弃上清，保留致密细胞沉淀（约 1–2 mm3）

• 可?。杭?span style="font-variant-numeric: normal; font-variant-east-asian: normal; font-variant-alternates: normal; font-size-adjust: none; font-language-override: normal; font-kerning: auto; font-optical-sizing: auto; font-feature-settings: normal; font-variation-settings: normal; font-variant-position: normal; font-variant-emoji: normal; font-stretch: normal; font-weight: 700; line-height: 24px; flex: 0 1 auto; flex-direction: row; justify-content: normal; align-items: normal; padding: 0px; margin: 0px; background-image: none; background-position: 0% 0%; background-size: auto; background-repeat: repeat; background-attachment: scroll; background-origin: padding-box; background-clip: border-box;">1% 琼脂糖（45℃预热）包裹细胞团，冷却凝固，便于后续操作

4. 脱水（梯度乙醇，防细胞收缩）

• 70% 乙醇 → 30 min

• 80% 乙醇 → 30 min

• 90% 乙醇 → 30 min

• 95% 乙醇 → 20 min × 2

• 100% 乙醇 → 20 min × 2

5. 透明（置换乙醇，利于浸蜡）

• 二甲苯 Ⅰ → 15 min

• 二甲苯 Ⅱ → 15 min

6. 浸蜡（石蜡浸透细胞团）

• 二甲苯：石蜡（1:1）混合液（56–58℃）→ 30 min

• 石蜡 Ⅰ（56–58℃）→ 60 min

• 石蜡 Ⅱ（56–58℃）→ 60 min

7. 包埋（制成蜡块）

• 包埋模具预热，倒入熔蜡（底层 1–2 mm），稍冷却

• 用镊子将细胞团切面朝下置于模具中央

• 补满熔蜡，冷却台凝固 15–30 min，脱模、修整蜡块

8. 切片与后续

• 轮转切片机切4 μm连续切片

• 45℃水浴展片，防脱载玻片捞片，60℃烤片 2–4 h

• 后续：脱蜡→染色（HE/Masson/IHC）→封片