一、实验前准备?

1. ?设备与试剂?

• ?关键设备?：冷冻切片机（箱体温度-20℃至-22℃）、OCT包埋剂、蔗糖梯度溶液（10%/15%/20%）、4%多聚甲醛灌注液
  。

• ?辅助工具?：解剖器械、铝箔模具、防卷板、细毛笔、载玻片
  。

2. ?动物处理?

• 麻醉大鼠后，经左心室灌注生理盐水（约50ml）至流出液澄清，再灌注4%多聚甲醛（约100ml）至组织硬化
  。

?二、脑组织处理步骤?

1. ?取材与固定?

• 剥离脑组织，置于4%多聚甲醛中4℃后固定12-24小时
  。

• ?脱水?：依次转入10%、15%、20%蔗糖溶液（4℃），每级至组织沉底（通常需4小时至过夜）
  。

2. ?包埋与速冻?

• 吸干组织表面液体，腹侧向下放置于铝箔模具中，用OCT包埋剂覆盖，避免气泡
  。

• 液氮速冻或-80℃保存备用
  。

?三、冷冻切片操作?

1. ?切片机设置?

• 箱体温度-20℃，样品头温度-22℃（可根据实际调整）
  。

2. ?修块与切片?

• 免疫组化：20-30μm（贴片）或30-50μm（漂片）

• RNA原位杂交：12-20μm
  。

• 修块厚度50-100μm，接近组织后调整切片厚度：

• 使用防卷板防止切片卷曲，毛笔辅助转移切片至培养皿
  。

?四、注意事项?

• ?样本干燥?：包埋前需吸干蔗糖溶液，否则易导致OCT与组织分离
  。

• ?温度控制?：切片过程中保持低温稳定性，避免组织软化
  。

• ?抗原?；?/span>?：冰冻切片优于石蜡切片，能更好保存抗原活性。

?五、应用场景?

• ?神经环路研究?：如病毒示踪或探针定位验证。

• ?病理分析?：脑损伤模型的组织学评估

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